慢性毒性實(shí)驗(yàn)(從胚胎到成魚,150天)
暴露方式:胚胎階段同急性實(shí)驗(yàn)。從12天后孵化開(kāi)始,將幼魚轉(zhuǎn)移至更大的養(yǎng)殖缸中,并繼續(xù)暴露于不同濃度的實(shí)驗(yàn)溶液(氯化鋁和GACP的多個(gè)稀釋濃度)中,直至150天(圖1)。
生長(zhǎng)監(jiān)測(cè):在魚生長(zhǎng)到60天、90天和150天時(shí),測(cè)量所有魚的體重和體長(zhǎng);
繁殖評(píng)估:從60天開(kāi)始,每天收集每個(gè)暴露缸的魚卵,統(tǒng)計(jì)產(chǎn)卵量、受精率,評(píng)估繁殖成功率。同時(shí),收集親本魚(F0代)在ZG濃度組產(chǎn)下的受精卵(F1代),在清潔海水中培養(yǎng)至12天,觀察其發(fā)育情況,評(píng)估跨代毒性;
成魚行為學(xué)分析:在魚生長(zhǎng)到105天時(shí),從陰性對(duì)照組和兩個(gè)ZG濃度組中挑選成魚,進(jìn)行一系列標(biāo)準(zhǔn)化的行為測(cè)試。所有行為測(cè)試均通過(guò)攝像機(jī)記錄,并使用EthoVision XT進(jìn)行自動(dòng)分析,確保了數(shù)據(jù)的客觀性和精確性;
群體行為測(cè)試:將6條魚(3雄3雌)放入一個(gè)新水箱,記錄其10分鐘內(nèi)的活動(dòng),分析每條魚的運(yùn)動(dòng)距離和群體內(nèi)個(gè)體間的平均距離,以評(píng)估群體的凝聚力;
探索能力測(cè)試(Z型迷宮):將單條魚放入一個(gè)Z型迷宮的安全區(qū),2分鐘后打開(kāi)通道,記錄其5分鐘內(nèi)的行為。分析指標(biāo)包括:離開(kāi)安全區(qū)的潛伏期、運(yùn)動(dòng)距離、進(jìn)入遠(yuǎn)端區(qū)域的次數(shù)和時(shí)間等,以評(píng)估其探索欲和膽量;
自發(fā)活動(dòng)測(cè)試:將單條魚放入一個(gè)3L的觀察缸中,適應(yīng)10分鐘后,記錄其50分鐘的自發(fā)運(yùn)動(dòng)軌跡,分析運(yùn)動(dòng)距離和路徑彎曲度,評(píng)估其基礎(chǔ)活動(dòng)水平;
焦慮水平測(cè)試:將單條魚放入一個(gè)狹長(zhǎng)的新式水箱中,記錄其5分鐘內(nèi)的垂直位置變化。分析其在上半?yún)^(qū)停留的時(shí)間和訪問(wèn)次數(shù)。